如何拯救被污染的细胞

夏天到了，细胞更容易被污染，很多养细胞的朋友在这方面困惑颇多，今天针对贴壁生长的细胞谈谈。 在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿，而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。 所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作，尽量减少进入培养体系细菌的数量。 如果不幸细胞被污染了怎么办呢？处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！

污染处理流程
1、将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10 mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。
2、继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。
3、继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。
4、重复步骤3再洗。
5、重复步骤3再洗。
6、加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
7、加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。
9、加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。
10、24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗。
11、24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。

以上是对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。 其它操作同；若为支原体，用泰乐处理支原体污染效果比较好；若为黑胶虫污染，我基本上重新培养了，除此还是需要你在无菌观念和无菌操作上下大功夫加强了，黑胶虫在科研领域还是很未知的啊。所以没有什么好的应对方法。预防为主，还是要强调无菌操作，尤其注意血清的质量，这个是主要来源。一般建议用北美血清，这个黑胶虫污染会概率小。

在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞（我还没有听到没救活的反馈）。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。